คากริลินไทด์ถูกสังเคราะห์ขึ้นได้อย่างไร?

Cagrilintide เป็นเปปไทด์สังเคราะห์ที่แสดงศักยภาพในการรักษาโรคอ้วนและเบาหวานชนิดที่ 2 ในฐานะซัพพลายเออร์ชั้นนำของคากริลินไทด์ เรามักถูกถามเกี่ยวกับกระบวนการสังเคราะห์เปปไทด์ที่สำคัญนี้ ในบล็อกโพสต์นี้ เราจะเจาะลึกรายละเอียดเกี่ยวกับวิธีการสังเคราะห์คาร์กริลินไทด์ โดยให้ภาพรวมที่ครอบคลุมของขั้นตอนที่เกี่ยวข้อง

ทำความเข้าใจกับสารคากริลินไทด์

ก่อนที่เราจะเจาะลึกถึงกระบวนการสังเคราะห์ เรามาทำความเข้าใจก่อนว่าคากริลินไทด์คืออะไร คากริลินไทด์ด้วยคาร์กริลินไทด์ CAS 1415456-99-3เป็นตัวเร่งตัวรับตัวรับคล้ายกลูคากอน เปปไทด์-1 (GLP-1) GLP-1 เป็นฮอร์โมนที่มีบทบาทสำคัญในการควบคุมระดับน้ำตาลในเลือด ความอยากอาหาร และการล้างข้อมูลในกระเพาะอาหาร ด้วยการเลียนแบบการออกฤทธิ์ของ GLP-1 คาร์กริลินไทด์สามารถช่วยควบคุมระดับน้ำตาลในเลือดและลดการบริโภคอาหาร ทำให้เป็นตัวเลือกที่มีแนวโน้มในการรักษาความผิดปกติของระบบเมตาบอลิซึม

พื้นฐานของการสังเคราะห์เปปไทด์

การสังเคราะห์เปปไทด์เป็นกระบวนการสร้างเปปไทด์ซึ่งเป็นสายโซ่สั้นของกรดอะมิโนที่เชื่อมโยงกันด้วยพันธะเปปไทด์ การสังเคราะห์เปปไทด์มีสองวิธีหลัก: การสังเคราะห์เปปไทด์เฟสของแข็ง (SPPS) และการสังเคราะห์เปปไทด์เฟสสารละลาย สำหรับคากริลินไทด์ การสังเคราะห์เปปไทด์เฟสโซลิดเป็นวิธีที่ต้องการเนื่องจากประสิทธิภาพ ความสามารถในการปรับขนาด และความสามารถในการผลิตเปปไทด์คุณภาพสูง

การสังเคราะห์เปปไทด์โซลิดเฟส (SPPS)

การสังเคราะห์เปปไทด์เฟสของแข็งได้รับการพัฒนาครั้งแรกโดย Robert Bruce Merrifield ในปี 1963 ซึ่งเขาได้รับรางวัลโนเบลสาขาเคมีในปี 1984 หลักการพื้นฐานของ SPPS เกี่ยวข้องกับการติดกรดอะมิโนที่ปลาย C ของเปปไทด์เข้ากับส่วนรองรับที่เป็นของแข็ง โดยทั่วไปคือเรซิน จากนั้นจึงเติมกรดอะมิโนตามลำดับทีละตัวในสายโซ่เปปไทด์ที่กำลังเติบโต

ขั้นตอนที่ 1: การเลือกและการโหลดเรซิน

ขั้นตอนแรกใน SPPS คือการเลือกเรซินที่เหมาะสม เรซินควรมีคุณสมบัติการบวมตัวที่ดีในตัวทำละลายที่ใช้ระหว่างการสังเคราะห์ มีความเสถียรทางเคมี และมีความสามารถในการรับน้ำหนักสูง เรซินทั่วไปที่ใช้ในการสังเคราะห์เปปไทด์ ได้แก่ เรซินที่มีโพลีสไตรีนและเรซินที่มีโพลีเอทิลีนไกลคอล (PEG)

เมื่อเลือกเรซินแล้ว กรดอะมิโนที่ปลาย C จะถูกยึดติดกับเรซินผ่านโมเลกุลตัวเชื่อมโยง ตัวเชื่อมโยงเป็นโมเลกุลแบบสองฟังก์ชันที่เชื่อมต่อกรดอะมิโนกับเรซิน และสามารถแยกออกได้เมื่อสิ้นสุดการสังเคราะห์เพื่อปล่อยเปปไทด์ออกจากเรซิน

ขั้นตอนที่ 2: การป้องกันกรดอะมิโน

กรดอะมิโนมีหมู่ฟังก์ชันที่เกิดปฏิกิริยา เช่น หมู่อะมิโนและหมู่คาร์บอกซิล ซึ่งจำเป็นต้องได้รับการปกป้องในระหว่างการสังเคราะห์เพื่อป้องกันปฏิกิริยาข้างเคียงที่ไม่พึงประสงค์ หมู่ป้องกันที่ใช้กันมากที่สุดสำหรับหมู่อะมิโนคือหมู่ 9-ฟลูออเรนิลเมทิลออกซีคาร์บอนิล (Fmoc) และหมู่เติร์ต-บิวทิลออกซีคาร์บอนิล (Boc) สำหรับหมู่คาร์บอกซิล มักใช้หมู่เติร์ต-บิวทิล (tBu)

ก่อนที่จะเติมกรดอะมิโนลงในสายเปปไทด์ที่กำลังเติบโต กลุ่มปกป้องบนกลุ่มอะมิโนของกรดอะมิโนที่เข้ามาจะถูกกำจัดออก เผยให้เห็นกลุ่มอะมิโนที่ทำปฏิกิริยาได้ โดยทั่วไปจะทำโดยใช้ฐาน เช่น พิเพอริดีน ในกรณีของการป้องกัน Fmoc

ขั้นตอนที่ 3: ปฏิกิริยาการมีเพศสัมพันธ์

ขั้นตอนต่อไปคือปฏิกิริยาการมีเพศสัมพันธ์ โดยที่กลุ่มคาร์บอกซิลที่เปิดใช้งานของกรดอะมิโนที่เข้ามาทำปฏิกิริยากับกลุ่มอะมิโนอิสระของสายเปปไทด์ที่กำลังเติบโตเพื่อสร้างพันธะเปปไทด์ หมู่คาร์บอกซิลของกรดอะมิโนถูกกระตุ้นโดยใช้รีเอเจนต์การควบคู่ เช่น N,N'-ไดไอโซโพรพิลคาร์โบไดอิไมด์ (DIC) หรือ 1-เอทิล-3-(3-ไดเมทิลอะมิโนโพรพิล)คาร์โบไดอิไมด์ (EDC) ต่อหน้าตัวเร่งปฏิกิริยา เช่น N-ไฮดรอกซีเบนโซไตรอาโซล (HOBt) หรือ 1-ไฮดรอกซี-7-อะซาเบนโซไตรอาโซล (HOAt)

โดยทั่วไปปฏิกิริยาคู่ควบจะดำเนินการในตัวทำละลายอินทรีย์ เช่น ไดเมทิลฟอร์มาไมด์ (DMF) หรือ N-เมทิล-2-ไพร์โรลิโดน (NMP) หลังจากปฏิกิริยาคัปปลิ้งเสร็จสมบูรณ์ รีเอเจนต์และผลพลอยได้ส่วนเกินจะถูกชะล้างออกไป และกลุ่มป้องกันบนกลุ่มอะมิโนของกรดอะมิโนที่เติมใหม่จะถูกเอาออกเพื่อเตรียมสำหรับขั้นตอนการควบคู่ถัดไป

ขั้นตอนที่ 4: การทำซ้ำของการมีเพศสัมพันธ์และการปลดการป้องกัน

ขั้นตอนการควบคู่และการแยกการป้องกันจะถูกทำซ้ำสำหรับกรดอะมิโนแต่ละตัวในลำดับเปปไทด์ จนกระทั่งเปปไทด์ความยาวสมบูรณ์ถูกสังเคราะห์ กระบวนการนี้เป็นแบบอัตโนมัติขั้นสูง และเครื่องสังเคราะห์เปปไทด์สมัยใหม่สามารถทำรอบการเชื่อมต่อและการแยกการป้องกันได้หลายรอบด้วยความแม่นยำและประสิทธิภาพสูง

ขั้นตอนที่ 5: ความแตกแยกจากเรซิน

เมื่อสังเคราะห์เปปไทด์แบบเต็มความยาวแล้ว จะต้องแยกออกจากเรซิน โดยทั่วไปจะทำโดยใช้ค็อกเทลสำหรับการตัดแยกซึ่งมีกรดแก่ เช่น กรดไตรฟลูออโรอะซิติก (TFA) และสารกำจัดขยะ เช่น น้ำ ไตรไอโซโพรพิลไซเลน (TIPS) หรือเอทานไนไทออล (EDT) เพื่อป้องกันปฏิกิริยาข้างเคียงและกำจัดกลุ่มปกป้องที่เหลืออยู่

ปฏิกิริยาการตัดแยกจะดำเนินการที่อุณหภูมิห้องในช่วงเวลาที่กำหนด หลังจากนั้นเปปไทด์จะถูกตกตะกอนจากค็อกเทลสำหรับการตัดแยกโดยใช้ตัวทำละลายที่ไม่มีขั้ว เช่น ไดเอทิลอีเทอร์ จากนั้นเปปไทด์ที่ตกตะกอนจะถูกรวบรวมโดยการกรองหรือการหมุนเหวี่ยง และล้างเพื่อกำจัดสิ่งเจือปนที่เหลืออยู่

การทำให้ Cagrilintide บริสุทธิ์

หลังจากการแยกออกจากเรซิน เปปไทด์คากริลินไทด์ดิบจำเป็นต้องได้รับการทำให้บริสุทธิ์เพื่อกำจัดสิ่งเจือปนใดๆ เช่น เปปไทด์ที่ถูกตัดทอน เปปไทด์ที่ถูกลบออก และผลพลอยได้อื่นๆ วิธีการทั่วไปที่สุดสำหรับการทำให้บริสุทธิ์ของเปปไทด์คือโครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูง (HPLC)

HPLC เป็นเทคนิคการแยกที่มีประสิทธิภาพซึ่งใช้เฟสเคลื่อนที่ของของเหลวและเฟสของแข็งที่อยู่นิ่งเพื่อแยกส่วนประกอบต่างๆ ของของผสมตามคุณสมบัติทางเคมี ในกรณีของการทำให้บริสุทธิ์ด้วยคาร์กริลินไทด์ มักใช้ HPLC แบบเฟสย้อนกลับ โดยที่เฟสที่อยู่นิ่งเป็นวัสดุที่ไม่มีขั้ว เช่น ออคตาเดซิลไซเลน (C18) และเฟสเคลื่อนที่เป็นส่วนผสมของน้ำและตัวทำละลายอินทรีย์ เช่น อะซีโตไนไตรล์หรือเมทานอล

เปปไทด์ที่หยาบถูกละลายในตัวทำละลายที่เหมาะสมและถูกฉีดเข้าไปในระบบ HPLC ส่วนประกอบต่างๆ ของส่วนผสมเปปไทด์จะถูกแยกออกจากกันเมื่อผ่านคอลัมน์ และเปปไทด์คากริลินไทด์บริสุทธิ์จะถูกรวบรวมเป็นพีคเดียว จากนั้นส่วนที่รวบรวมได้จะถูกไลโอฟิไลซ์เพื่อให้ได้เปปไทด์บริสุทธิ์ในรูปแบบผงแห้ง

การศึกษาคุณลักษณะของ Cagrilintide

เมื่อ Cagrilintide เปปไทด์ได้รับการทำให้บริสุทธิ์แล้ว จะต้องระบุลักษณะเฉพาะเพื่อยืนยันเอกลักษณ์ ความบริสุทธิ์ และคุณภาพ วิธีการทั่วไปในการจำแนกลักษณะของเปปไทด์ ได้แก่ แมสสเปกโตรเมทรี (MS), สเปกโทรสโกปีด้วยคลื่นสนามแม่เหล็กนิวเคลียร์ (NMR) และโครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูง (HPLC)

แมสสเปกโตรเมตรีใช้เพื่อกำหนดน้ำหนักโมเลกุลของเปปไทด์และยืนยันเอกลักษณ์ของมัน NMR สเปกโทรสโกปีให้ข้อมูลเกี่ยวกับโครงสร้างและโครงสร้างของเปปไทด์ HPLC ใช้เพื่อกำหนดความบริสุทธิ์ของเปปไทด์โดยการวิเคราะห์พื้นที่พีคของพีคของเปปไทด์หลักที่สัมพันธ์กับพื้นที่พีคทั้งหมด

ข้อเสนอของเราในฐานะซัพพลายเออร์ Cagrilintide

ในฐานะซัพพลายเออร์ที่เชื่อถือได้ของคากริลินไทด์ เราขอนำเสนอผลิตภัณฑ์คุณภาพสูงคากริลินไทด์-10มกสินค้าด้วยCAS 1415456-99-3. คากริลินไทด์ของเราถูกสังเคราะห์โดยใช้เทคนิคการสังเคราะห์เปปไทด์เฟสของแข็งที่ล้ำสมัย และบริสุทธิ์ให้มีความบริสุทธิ์ในระดับสูง เรารับประกันการควบคุมคุณภาพอย่างเข้มงวดในทุกขั้นตอนของกระบวนการสังเคราะห์และการทำให้บริสุทธิ์เพื่อรับประกันความปลอดภัยและประสิทธิภาพของผลิตภัณฑ์ของเรา

หากคุณสนใจที่จะซื้อคาร์กริลินไทด์เพื่อการวิจัยหรือวัตถุประสงค์อื่นๆ เราขอเชิญคุณติดต่อเราเพื่อขอหารือโดยละเอียดเกี่ยวกับความต้องการของคุณ เรามุ่งมั่นที่จะให้บริการลูกค้าที่เป็นเลิศและส่งมอบผลิตภัณฑ์ของเราให้ตรงเวลา ไม่ว่าคุณจะต้องการปริมาณเล็กน้อยสำหรับการวิจัยเบื้องต้นหรือการผลิตขนาดใหญ่ เราก็สามารถตอบสนองความต้องการของคุณได้

อ้างอิง

• เมอร์ริฟิลด์, RB (1963) การสังเคราะห์เปปไทด์เฟสของแข็ง I. การสังเคราะห์เตตราเปปไทด์ วารสารสมาคมเคมีอเมริกัน, 85(14), 2149-2154.
• ฟิลด์, GB, & Noble, RL (1990) การสังเคราะห์เปปไทด์เฟสของแข็งโดยใช้กรดอะมิโน 9-ฟลูออเรนิลเมทอกซีคาร์บอนิล วารสารนานาชาติด้านการวิจัยเปปไทด์และโปรตีน, 35(3), 161-214
• แอเธอร์ตัน อี. และเชพพาร์ด อาร์ซี (1989) การสังเคราะห์เปปไทด์เฟสของแข็ง: แนวทางการปฏิบัติ สำนักพิมพ์มหาวิทยาลัยออกซ์ฟอร์ด.